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熒光技術在生物化學及分子生物學研究中應用主要包括以下幾個方面
日期：2025-05-14 13:39
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摘要：
1、物質的定性：不同的熒光物質有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，因此可用熒光進行物質的鑒別。與吸收光譜法相比，熒光法具有更的選擇性。
2、定量測定：利用在較低濃度下熒光強度與樣品濃度成正比這關系可以定量分析樣品中熒光組分的含量，常用于測定氨基酸、蛋白質、核酸的含量。熒光定量測定的個點是靈敏度，例如維生素B2的測定限量可達1毫微克/毫升，這點使測定時所需要樣品量大大減少。 這種定量測定方法還可應用于酶催化的反應，只要反應前后有熒光強度的變化，就可用來測定酶的含量及酶反應的速率等。
3、研究生物大分子的物理化學特性及其分子的結構和構象：熒光的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產率和熒光壽命等參數不僅和分子內熒光發(fā)色基團的本身結構有關，而且還強烈地依賴于發(fā)色團周圍的環(huán)境，即對周圍環(huán)境十分敏感。利用此特點可通過測定上述有關熒光參數的變化來研究熒光發(fā)色團所在部位的微環(huán)境的特征及其變化。在此研究中，除了利用生物大分子本身具有的熒光發(fā)色團（如色氨酸、酪氨酸、鳥苷酸等，此類熒光稱為內源熒光）以外，可將些特殊的熒光染料分子共價地結合或吸附在生物大分子的某部位，通過測定該染料分子的熒光特性變化來研究生物大分子，這種染料分子被稱為“熒光探針”，它們發(fā)出的熒光般稱為外源熒光。熒光探針的應用，大大地開拓了熒光技術在分子生物學中的應用范圍。
4、利用熒光壽命、量子產率等參數可以研究生物大分子中的能量轉移現象：通過該現象的研究，可以獲得生物大分子內部的許多信息。
以往人們常用熒光偏振做指標來研究生物大分子動力學。人們趨于用熒光偏振隨時間的衰減來研究這些問題。由這些結果可以研究分子之間的相互作用、分子間結合的緊密程度、蛋白質、核酸分子的解聚程度等等。
另外，熒光技術在**學中亦有廣泛的應用。重要的就是熒光抗體法。將某些熒光染料與血清抗體相結合，這種標記的抗體仍可專地與相應抗原發(fā)生結合，形成的復合體具有熒光特性，從而可以確定抗原或抗體的存在及其含量。
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